病理性瘢痕組織中c-fos和5-HT表達及與其增生和痛癢的關(guān)系

目的 通過對病理性瘢痕組織中c-fos和5-HT表達變化的研究，探討其與病理性瘢痕痛癢和增生的關(guān)系。方法 利用免疫組化方法檢測病理性瘢痕和正常皮膚中c-fos和5-HT的表達情況。結(jié)果 痛癢的病理性瘢痕組織中c-fos、5-HT的表達顯著高于正常皮膚組織和非痛癢的瘢痕組織（ F=19.86、17.61，q=5.43～8.84， P < 0.01）;非痛癢的瘢痕組織中c-fos的表達顯著高于正常皮膚（ q=3.41，P <0.01），而5-HT表達無明顯差異（ P > 0.05 ）。結(jié)論 c-fos、5-HT表達增高可能導(dǎo)致病理性瘢痕臨床痛癢癥狀的發(fā)生，c-fos表達增高可能與病理性瘢痕的形成、發(fā)展有關(guān)。 　瘙癢和灼痛是病理性瘢痕常見的臨床癥狀，尤其在瘢痕增生的早期，往往痛癢越重者，瘢痕增生越快，但是痛癢的發(fā)生機制很復(fù)雜，涉及到神經(jīng)生理、內(nèi)源性生化物質(zhì)等多個方面。許多體內(nèi)外的因素及細胞受損后所產(chǎn)生的物質(zhì)均能引起痛癢，其機制目前尚不十分清楚。本研究采用免疫組化方法檢測原癌基因c-fos和5-羥色胺（5-HT）在痛癢、非痛癢瘢痕及正常皮膚組織中的表達情況，旨在探討這兩種生化遞質(zhì)的變化與病理性瘢痕增生及其痛癢癥狀相關(guān)性，為臨床治療瘢痕增生及痛癢癥狀提供新思路。 1 材料和方法 　　1.1 標本的取材與分組 瘢痕標本均來源于我院整形外科門診手術(shù)病人（病程6～24個月）典型的病理性瘢痕（瘢痕疙瘩或 增生性瘢痕）組織，標本取瘢痕中心部分0.7 cm×1.0 cm全層組織塊;正常皮膚取自美容手術(shù)病人，修剪至0.5 cm×0.7 cm大小。A組（痛癢瘢痕組）:瘢痕潮紅，高出皮面，觸之硬，具有明顯的瘙癢或刺痛癥狀;B組（無痛癢瘢痕組）:無任何自覺癥狀;C組（正常皮膚組）:取自無瘢痕體質(zhì)及免疫性疾病的外科手術(shù)病人，每組標本20例。 　　1.2 免疫組化檢測及結(jié)果判定 采用通用型二步法，兔抗人5-HT多抗（工作液）為美國Zymed公司產(chǎn)品，兔抗人c-fos多抗（稀釋度1∶100）為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，Pic-TureTM-PV6000免疫組化染色試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。其中，檢測c-fos行微波抗原修復(fù)。DAB顯色，鏡下控制顯色時間。陰性對照省略一抗，以PBS代替。染色陽性信號為細胞核或細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。 　　1.3 圖像定量分析采用 VIDAS 圖像分析系統(tǒng)（德國 Opton 公 司），設(shè)定灰度級為256級，白為0，黑為255;每組切片隨機選取5張，光鏡下（40倍）每張切片按系統(tǒng)抽樣法隨機取10個視野;對所測定組織的背底進行面積、灰度、吸光度測定，制定標準作為參考值;通過計算機自動數(shù)據(jù)統(tǒng)計系統(tǒng)計算出所測細胞平均吸光度、面密度、積分吸光度，以積分吸光度為主要指標進行定量分析。 　　1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 圖像分析數(shù)據(jù)以 x±s 表示，應(yīng)用SPSS 10.5統(tǒng)計軟件進行方差分析。 　　2 結(jié)果 　　2.1 形態(tài)學(xué)觀察 　　2.1.1c-fos免疫組化染色 在正常皮膚組織中，c-fos蛋白產(chǎn)物主要分布于表皮基底層細胞、小血管內(nèi)皮細胞、皮脂腺及毛囊上皮細胞，胞核及胞質(zhì)均有著色。在痛癢的瘢痕組織中，除表皮基底層細胞、小血管內(nèi)皮細胞染色陽性外，在膠原結(jié)節(jié)、漩渦狀結(jié)構(gòu) 中的成纖維細胞中呈陽性著色，密度高、著色濃。在無痛癢的瘢痕組織中，c-fos蛋白分布于表皮基底層細胞，但分布密度及著色較痛癢的瘢痕組織淡而稀少，成纖維細胞中c-fos蛋白陽性分布很少。 　　2.1.25-HT免疫組化染色 5-HT表達陽性細胞主要是表皮基底層細胞、小血管內(nèi)皮細胞、皮膚附屬器、成纖維細胞，痛癢的瘢痕組織5-HT蛋白陽性著色程度及陽性細胞分布范圍強于、大于非痛癢的瘢痕組織及正常皮膚組織。 　　2.2 圖像定量分析結(jié)果 　　2.2.1c-fos c-fos陽性分布的平均吸光度、面密度和積分吸光度均以A組最高，C組最低。其中A組和B組c-fos的表達均顯著高于C組（ F=19.86，q=3.41、8.84，P <0.01）;A組又顯著高于B組（ q= 5.43，P <0.01）。見表1。 　　2.2.25-HT A組5-HT的表達均顯著高于B組和C組（ F=17.61，q=7.86、6.47，P <0.01）;B組和C組相比差異無顯著性（ P >0.05）。見表1。 　　表1 正常皮膚及瘢痕組織中c-fos和5-HT圖像分析結(jié)果（略） 　　3 討論 　　增生性瘢痕與瘢痕疙瘩是臨床上常見的病理性瘢痕，是創(chuàng)傷愈合反應(yīng)過度的結(jié)果，表現(xiàn)為瘤樣增生并伴有不同程度的痛癢癥狀，通常痛癢癥狀越重者，瘢痕增生越快。目前多數(shù)學(xué)者致力于瘢痕發(fā)病機制的研究，而有關(guān)病理性瘢痕的痛癢機制研究尚不多見。已有研究證實，瘢痕疙瘩及增生性瘢痕中神經(jīng)纖維增生、粗大、排列雜亂，其組織中肥大細胞數(shù)量增多，提示神經(jīng)及生化遞質(zhì)的變化與痛癢癥狀有關(guān)，但有關(guān)神經(jīng)纖維及神經(jīng)遞質(zhì)、生化遞質(zhì)的變化與病理性瘢痕痛癢相關(guān)性的研究目前在國內(nèi)外尚罕見報道。為此，本研究檢測了c-fos和5-HT在病理性瘢痕中的表達情況，旨在探討這兩種生化遞質(zhì)的變化與病理性瘢痕增生及其痛癢癥狀的相關(guān)性。 　　3.1 c-fos 即刻早期基因c-fos是編碼核蛋白的癌基因，其產(chǎn)物具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，介導(dǎo)細胞由靜止期向增殖期轉(zhuǎn)化并在傷口愈合中起作用。它在大多數(shù)正常細胞中表達水平較低，但可受多種炎癥遞質(zhì)、炎癥細胞 和細胞因子刺激激活，激活后可激活多種炎癥遞質(zhì)及細胞因子［1］。原癌基因c-fos的表達與細胞生長、分化和啟動細胞的增殖活性密切相關(guān)［2］。本研究顯示，瘢痕組織中c-fos免疫陽性細胞分布密度顯著高于正常皮膚組織。c-fos蛋白產(chǎn)物主要分布于基底層細胞、血管內(nèi)皮細胞以及增生性瘢痕組織的成纖維細胞中，這些細胞均是功能活躍的細胞。基底層細胞是皮膚組織中有絲分裂和新陳代謝最為活躍的細胞，血管內(nèi)皮細胞可合成內(nèi)皮素等許多細胞因子，成纖維細胞是皮膚組織中膠原合成的主要來源，據(jù)此推測c-fos的表達可能與這些細胞的功能有關(guān)。成纖維細胞是皮膚傷口愈合和瘢痕增生的關(guān)鍵細胞，與膠原和細胞外基質(zhì)產(chǎn)生密切相關(guān)，c-fos在瘢痕組織中呈強陽性表達，提示它們的表達可能在瘢痕增生中起重要作用。有研究表明，瘢痕組織中高水平的TGF-β可不斷刺激c-fos的表達，并促進膠原合成，致使瘢痕增生［3］。本文結(jié)果與文獻報道一致，即病理性瘢痕組織中c-fos的表達高于正常皮膚組織，提示c-fos的激活可能參與了成纖維細胞的分化增殖或表型轉(zhuǎn)化或膠原合成與降解，以及對細胞因子的調(diào)控并導(dǎo)致瘢痕異常增生。 　　近年來研究結(jié)果表明，c-fos還與疼痛關(guān)系密切。c-fos基礎(chǔ)表達水平很低，它在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的表達與痛覺調(diào)制有關(guān)，外周傷害性刺激可使脊髓背角c-fos蛋白表達增加，c-fos蛋白可作為傷害性感受神經(jīng)元被激活的標志物［4］。HUNT等［5］首次證明c-fos與疼痛的關(guān)系，即外周的傷害性刺激可以快速誘導(dǎo)c-fos的表達。張仲文等［6］在實驗中發(fā)現(xiàn)，硬膜外瘢痕粘連和疼痛程度與c-fos表達呈正相關(guān)。本研究結(jié)果證實，c-fos蛋白在痛癢的病理性瘢痕組織中表達顯著高于非痛癢的病理性瘢痕組織，正常皮膚組織僅有少量表達，提示c-fos的激活與病理性瘢痕臨床痛癢癥狀的發(fā)生密切相關(guān)。目前對這方面的研究尚未見報道，根據(jù)原癌基因的生物學(xué)，并結(jié)合有關(guān)體外試驗，作者推測:原癌基因c-fos影響瘢痕痛癢可能是通過作用于不同類型細胞（包括組織修復(fù)細胞與炎性細胞）和調(diào)控生長因子的產(chǎn)生兩條途徑來實現(xiàn)的，即原癌基因持續(xù)高表達將激活成纖維細胞生長因子基因或成纖維細胞，導(dǎo)致組織修復(fù)過度，激活炎癥細胞又將導(dǎo)致蛋白酶分泌增多而使胞外基質(zhì)溶解增加，從而釋放多種可致痛癢的遞質(zhì)，但其具體作用機制以及c-fos具體高到什么程度才能引起疼痛，還有待于進一步研究。 　　3.25-HT 作為一種經(jīng)典的致痛致癢遞質(zhì)，5-HT在體內(nèi)廣泛分布并具有多種生物活性，它不僅是重要的神經(jīng)遞質(zhì)，也是重要的免疫調(diào)節(jié)因子。它在周圍組織中的致痛機制是:當組織破壞時，5-HT從解體的血小板中釋放出來，低濃度即可致痛，且主要參與血管性疼痛、損傷性疼痛。1985年NARA［7］采用Nin-hydin法分別測定了人正常皮膚和瘢痕組織中5-HT的含量，發(fā)現(xiàn)5-HT可致創(chuàng)傷愈合后非穩(wěn)定瘢痕組織的痛癢感，并且發(fā)現(xiàn)瘢痕組織中5-HT的多寡與傷后時間長短無關(guān)，但與傷后瘢痕狀態(tài)有關(guān)，肥厚、發(fā)紅并攣縮的非穩(wěn)定型瘢痕組織5-HT含量明顯高于傷后早期穩(wěn)定型瘢痕組織。但他并未將痛癢和非痛癢的瘢痕明確分組。本研究顯示，痛癢的瘢痕組織中5-HT蛋白陽性著色程度及陽性細胞分布范圍強于非痛癢的瘢痕組織及正常皮膚組織;非痛癢的瘢痕組織和正常皮膚組織相比無顯著差異，提示5-HT表達的升高可導(dǎo)致病理性瘢痕疼痛、瘙癢癥狀的發(fā)生。而NARA在正常人皮膚中未檢測到5-HT，可能與不同實驗方法有關(guān)，他所采用的Nin- hydin法不足以測定出正常人皮膚中微量的5-HT。有關(guān)結(jié)締組織代謝與5-HT關(guān)系的報道較少，但存在著兩方面的意見。NAGAI［8］的實驗結(jié)果表明，結(jié)締組織中5-HT含量比組胺少得多，認為5-HT在結(jié)締組織中的作用是次要的。崔玉芳等［9］則認為5-HT對離體培養(yǎng)的成纖維細胞也有促增殖作用，且這種作用有時甚至比組胺還強。通過以上的研究推測:c-fos、5-HT可能與病理性瘢痕的臨床痛癢癥狀有關(guān)，這兩種生化遞質(zhì)的表達增高可能導(dǎo)致痛癢癥狀的發(fā)生，c-fos還可能促進病理性瘢痕的增生。據(jù)此，設(shè)想若能通過調(diào)控瘢痕組織中c-fos、5-HT的含量來抑制瘢痕的生長和減輕瘢痕的痛癢癥狀，將為病理性瘢痕防治提供一種新途徑［10］，但其確切的反應(yīng)途徑和方式還有待于進一步研究。

疤痕修復(fù)

缺少的東西終于再慢慢補上了.